Langkah awal untuk semua kultur jaringan adalah jaringan tanaman, yang disebut eksplan. Hal ini dapat dimulai dari setiap bagian dari tanaman - akar, batang, tangkai daun, daun atau bunga - meskipun keberhasilan salah satu dari bagian tersebut bervariasi antara spesies. Hal ini penting bahwa permukaan eksplan harus disterilkan untuk menghilangkan semua kontaminasi terhadap mikroba. Pembelahan sel tanaman lambat dibandingkan pertumbuhan bakteri dan jamur, dan bahkan kontaminan kecil akan dengan mudah over-menumbuhkan kultur jaringan tanaman. Eksplan tersebut kemudian diinkubasi pada media nutrisi steril untuk memulai kultur jaringan. Komposisi media pertumbuhan dirancang untuk kedua mempertahankan sel-sel tumbuhan, mendorong pembelahan sel, dan mengontrol perkembangan baik massa sel dibeda-bedakan, atau organ tanaman tertentu.
The concentration of the growth regulators in the medium, namely auxin and cytokinin, seems to be the critical factor for determining whether a tissue culture is initiated, and how it subsequently develops. The explant should initially form a callus, from which it is possible to generate multiple embryos and then shoots, forming the basis for plant regeneration and thus the technology of micropropagation. The first stage of tissue culture initiation is vital for information on what combination of media components will give a friable, fast-growing callus, or a green chlorophyllous callus, or embryo, root or shoot formation.
Konsentrasi zat pengatur tumbuh dalam medium, yaitu auksin dan sitokinin, tampaknya menjadi faktor penting untuk menentukan apakah suatu kultur jaringan dimulai, dan bagaimana hal itu kemudian berkembang. Eksplan harus awalnya membentuk kalus, dari yang dimungkinkan untuk menghasilkan beberapa embrio dan kemudian tunas, membentuk dasar untuk regenerasi tanaman dan dengan demikian teknologi budidaya. Tahap pertama dari inisiasi kultur jaringan sangat penting untuk informasi tentang apa kombinasi komponen media akan memberikan gembur, cepat tumbuh kalus, atau chlorophyllous kalus hijau, atau embrio, akar atau menembak formasi.
There is at present no way to predict the exact growth medium, and growth protocol, to generate a particular type of callus. These characteristics have to be determined through a carefully designed and observed experiment for each new plant species, and frequently also for each new variety of the species which is taken into tissue culture. The basis of the experiment will be media and protocols that give the desired effect in other plant species, and experience.
Ada saat ini tidak ada cara untuk memprediksi media pertumbuhan yang tepat, dan protokol pertumbuhan, untuk menghasilkan jenis tertentu kalus. Karakteristik ini harus ditentukan melalui percobaan yang dirancang dan diamati dengan hati-hati untuk setiap spesies tanaman baru, dan sering juga untuk setiap varietas baru dari spesies yang dibawa ke kultur jaringan. Dasar dari percobaan akan media dan protokol yang memberikan efek yang diinginkan pada spesies tanaman lain, dan pengalaman.
The Demonstration of African violet Culture. ( Demonstrasi dari Budaya Afrika Violet)
The strategy for designing a medium to initiate tissue culture, showing how growth regulators and other factors modulate development, can be demonstrated using the African Violet, a popular house plant. Leaf sections are the source of explants. This demonstration is regularly carried out by a student class, and gives reliable results. Sterile supplies are provided from central facilities, and provision of sterile working areas (for example, in laminar flow hoods) is an advantage, although cultures can be initiated in an open laboratory with careful aseptic technique. The standard precautions used during any laboratory work involving chemicals or microbes should be adopted. If you are in any doubt about safety hazards associated with this demonstration, you should consult your local safety adviser.
Strategi untuk merancang media untuk melakukan kultur jaringan, menunjukkan bagaimana regulator pertumbuhan dan faktor-faktor lain memodulasi pembangunan, dapat ditunjukkan dengan menggunakan African Violet, tanaman rumah populer. Bagian daun adalah sumber eksplan. Demonstrasi ini secara teratur dilakukan oleh siswa kelas, dan memberikan hasil yang dapat diandalkan. Persediaan steril disediakan dari fasilitas pusat, dan penyediaan wilayah kerja steril (misalnya, di kerudung aliran laminar) adalah keuntungan, meskipun budaya dapat dimulai di sebuah laboratorium terbuka dengan teknik aseptik yang cermat. Tindakan pencegahan standar yang digunakan dalam setiap pekerjaan laboratorium yang melibatkan bahan kimia atau mikroba harus diadopsi. Jika Anda berada dalam keraguan tentang bahaya keamanan terkait dengan demonstrasi ini, Anda harus berkonsultasi penasihat keamanan setempat.
Step 1 - selection of the leaves.Leaves are cut from healthy plants, leaving a short length of petiole attached. They should be selected to each yield several explants of leaf squares with approximately 1 cm sides. The youngest and oldest leaves should be avoided. Wash the dust off the leaves in a beaker of distilled water, holding the leaf stalk with forceps.
Langkah 1 - pemilihan daun. Daun dipotong dari tanaman yang sehat, meninggalkan panjang pendek tangkai daun terpasang. Mereka harus dipilih untuk setiap hasil beberapa eksplan kotak daun dengan sekitar 1 cm sisi. Daun termuda dan tertua harus dihindari. Cuci debu dari daun dalam gelas air suling, memegang tangkai daun dengan tang.
Step 2 - surface sterilisation and preparation of the explants. This part of the procedure should be carried out in a sterile working area, or with meticulous aseptic technique. The leaf, with the petiole still attached, should be immersed in 70% ethanol for 30 seconds, then transferred to a sterile petri dish. Sterile scissors and forceps are then used to cut squares from the leaf as explants, each with approximately 1 cm sides.The explants are transferred into a 10% hypochlorite bleach solution for 5 minutes, gently agitating once or twice during this time. They are then washed free of bleach by immersing in four successive beakers of sterile distilled water, leaving them for 2-3 minutes in each. Three explants are placed on each petri dish of growth medium (see table and below), with the upper epidermis pressed gently against the surface of the agar to make good contact. The petri dishes are sealed with plastic film to prevent moisture loss, and incubated at 25oC in 16h light/8h dark.
Langkah 2 - sterilisasi permukaan dan persiapan eksplan. Ini bagian dari prosedur harus dilakukan di wilayah kerja steril, atau dengan teknik aseptik teliti. Daun, dengan tangkai daun masih menempel, harus direndam dalam 70% etanol selama 30 detik, kemudian dipindahkan ke cawan petri steril. Gunting steril dan forsep kemudian digunakan untuk memotong kotak dari daun sebagai eksplan, masing-masing dengan sekitar 1 cm sisi. Eksplan dipindahkan ke dalam larutan pemutih hipoklorit 10% selama 5 menit, lembut mengagitasi sekali atau dua kali selama waktu ini. Mereka kemudian dicuci bebas dari pemutih dengan cara merendam dalam empat gelas berturut air suling steril, meninggalkan mereka selama 2-3 menit di setiap. Tiga eksplan ditempatkan pada masing-masing cawan petri dari medium pertumbuhan (lihat tabel dan bawah), dengan epidermis atas ditekan lembut terhadap permukaan agar-agar untuk membuat kontak yang baik. Piring petri yang disegel dengan film plastik untuk mencegah hilangnya kelembaban, dan diinkubasi pada 25oC dalam cahaya 16h / 8h gelap.
Step 3 - assessment of tissue culture development.The explants are incubated for 4 - 6 weeks, and inspected at weekly or fortnightly intervals. The growth of obvious bacterial or fungal colonies indicates contamination, and data from such cultures is obviously suspect. The development of dark brown tissue cultures can also be a consequence of contamination. The media used in the demonstration are designed to show the effects of auxin, cytokinin, sucrose and mineral salts on development. The media were based on the well-known Murashige and Skoog inorganic medium, with additions as shown in this table.
Langkah 3 - pengkajian pengembangan kultur jaringan. Eksplan yang diinkubasi selama 4 - 6 minggu, dan diperiksa pada interval mingguan atau dua minggu. Pertumbuhan jelas koloni bakteri atau jamur menunjukkan kontaminasi, dan data dari budaya tersebut jelas menduga. Perkembangan kultur jaringan coklat gelap juga bisa menjadi konsekuensi dari kontaminasi.Media yang digunakan dalam demonstrasi yang dirancang untuk menunjukkan efek auksin, sitokinin, sukrosa dan garam-garam mineral pada pengembangan.
Post a Comment