Proses Dasar Kloning DNA

The basis of the development of recombinant DNA technology was the discovery of the sexual mechanism in bacteria that have been proven in 1946. The consequences of sexual mechanisms are:

1. Causes the formation of a combination of genes from two different cells.

2. Exchange of DNA or genes from one cell to another. This mechanism is not sexually reproductive or do not produce offspring.

Dasar dari pengembangan teknologi DNA Rekombinan adalah ditemukannya mekanisme seksual pada bakteri yang telah dibuktikan pada tahun 1946. Konsekuensi dari mekanisme seksual adalah:

1. Menyebabkan terbentuknya kombinasi gen-gen yang berasal dari dua sel yang berbeda.

2.Terjadi pertukaran DNA atau gen dari satu sel ke sel yang lain. Mekanisme seksual ini tidak bersifat reproduktif atau tidak menghasilkan keturunan.

Nucleic acid which is a source of genetic information in each cell, is a molecule that can be manipulated .There are two kinds, namely acid nucleat acid ribonucleat: ribonucleat acid (RNA) and deoksiribonucleat acid (DNA).

Asam nukleat yang merupakan sumber informasi genetika didalam setiap sel,adalah molekul yang bisa dimanipulasi .Ada dua macam asam nucleat yaitu asam ribonucleat :Asam ribonucleat ( RNA ) dan asam deoksiribonucleat (DNA).

Nucleic acids are large molecules form chains panjang.Rantai stranded nucleic acids are arranged ole (fragment) DNA organism components consisting of:

1. 5-carbon pentose sugar (ie sugar ribose in RNA, and deoxyribose sugar in DNA)

2. Cluster phosphate (PO4-2)

3. Bases

Asam nukleat adalah molekul besar berupa utas rantai yang panjang.Rantai asam nukleat disusun ole(fragmen) DNA organisme komponen-komponen yang terdiri dari :

1. Gula pentosa berkarbon 5 ( yaitu gula ribosa pada RNA,dan gula Deoksiribosa pada DNA)

2. Gugus fosfat (PO4-2)

3. Basa

DNA transfer or transfer DNA into the bacteria can be in three ways, namely conjugation, transformation and transduction. DNA into the bacterial cell can further integrate with chromosomal DNA or recombinant bacteria to form chromosomes.

Transfer DNA atau perpindahan DNA ke dalam bakteri dapat melalui tiga cara, yaitu konjugasi, transformasi, dan transduksi. DNA yang masuk ke dalam sel bakteri selanjutnya dapat berintegrasi dengan DNA atau kromosom bakteri sehingga terbentuk kromosom rekombinan.

a) Conjugation is the transfer of DNA from one cell (donor cell) into another bacterial cell (cell recipients) through physical contact between the two cells. Donor cells incorporate some of its DNA into the cell recipients. This DNA transfer via sex pili owned by the donor cells. Cell recipients do not have sex pili. DNA from the cell recipients are moved to a recipient cell replication so that once this process is complete, the cells do not lose male DNA. Into two cells do not increase the number of cells and the cells produced no children. Therefore, conjugation process is also known as the sexual or reproductive mechanism.

a. Konjugasi merupakan perpindahan DNA dari satu sel (sel donor) ke dalam sel bakteri lainnya (sel resepien) melalui kontak fisik antara kedua sel. Sel donor memasukkan sebagian DNA-nya ke dalam sel resepien. Transfer DNA ini melalui pili seks yang dimiliki oleh sel donor. Sel resepien tidak memiliki pili seks. DNA dari sel resepien berpindah ke sel resipien secara replikatif sehingga setelah proses ini selesai, sel jantan tidak kehilangan DNA. Ke dua sel tidak mengalami peningkatan jumlah sel dan tidak dihasilkan sel anak. Oleh karena itu, proses konjugasi disebut juga sebagai proses atau mekanisme seksual yang tidak reproduktif.

b) Transformation is a collection of DNA by bacteria from the environment around him. DNA is located in bacteria (foreign DNA) may be pieces of DNA or DNA fragment derived from another bacterial cell or organism to another. The entry of the DNA from the environment into bacterial cells can occur naturally. In 1928 discovered virulent strain of bacteria that does not change its nature can become virulent due to the non-virulent strain was mixed with cells of virulent strains of bacteria that have been turned off. In 1944 it was found that changes in the nature or the transformation of virulent bacteria become virulent due to the presence of DNA from the virulent strain of bacteria cells into the non-virulent strain of bacteria.

b. Transformasi merupakan pengambilan DNA oleh bakteri dari lingkungan di sekelilingnya. DNA yang berada di sekitar bakteri (DNA asing) dapat berupa potongan DNA atau fragmen DNA yang berasal dari sel bakteri yang lain atau organisme yang lain. Masuknya DNA dari lingkungan ke dalam sel bakteri ini dapat terjadi secara alami. Pada tahun 1928 ditemukan strain bakteri yang tidak virulen dapat berubah sifatnya menjadi virulen disebabkan adanya strain yang tidak virulen dicampur dengan sel-sel bakteri strain virulen yang telah dimatikan. Tahun 1944 ditemukan bahwa perubahan sifat atau transformasi dari bakteri yang tidak virulen menjadi virulen disebabkan oleh adanya DNA dari sel bakteri strain virulen yang masuk ke dalam bakteri strain yang tidak virulen.

c) Transduction is way transfer of DNA from one cell to the other cells through the intermediary of bacteriophages. Some types of viruses multiply in bacterial cells. Viruses that its host is a bacterium often called bacteriophage or phage. When the virus infects bacteria, phage insert its DNA into bacterial cells. The DNA will then be replicated in a bacterial cell or integrate into the chromosome bactery. Phage DNA is packaged when forming new phage particles will carry most of its host bacterial DNA. Furthermore, if the phage infects another bacterium, the phage DNA will include the portion containing the DNA of the host cell before. So, naturally phage DNA transfer from one SLE bacterium to another.

c. Transduksi adalah cara pemindahan DNA dari satu sel ke dalam sel lainnya melalui perantaraan bakteriofage. Beberapa jenis virus berkembang biak di dalam sel bakteri. Virus-virus yang inangnya adalah bakteri sering disebut bakteriofag atau fage. Ketika virus menginfeksi bakteri, fage memasukkan DNA-nya ke dalam sel bakteri. DNA tersebut kemudian akan bereplikasi di dalam sel bakteri atau berintegrasi dengan kromosom baketri. DNA fage yang dikemas ketika membentuk partikel fage baru akan membawa sebagian DNA bakteri yang menjadi inangnya. Selanjutnya jika fage tersebut menginfeksi bakteri yang lain, maka fage akan memasukkan DNAnya yang sebagian mengandung DNA sel inang sebelumnya. Jadi, secara alami fage memindahkan DNA dari satu sle bakteri ke bakteri yang lain.

Essential elements needed in DNA cloning are:

1. Enzymes retraction (DNA cutting enzyme)

2. Cloning vector (carrier)

3. ligase enzyme that serves to connect the DNA chain

Unsur-unsur yang esensial diperlukan dalam kloning DNA adalah:

1. Enzim retraksi (enzim pemotong DNA)

2. Kloning vektor (pembawa)

3. Enzim ligase yang berfungsi menyambung rantai DNA



The basic processes in DNA cloning include:

1. Cutting DNA (DNA organism under study and DNA vectors)

2. Grafting pieces (fragments) DNA of organisms with DNA vector using ligase enzymes

3. Transformation of recombinant DNA (vector + DNA inserts) into the bacterial cells of Escherichia coli.

4. Selection (screening) to obtain the desired DNA clones.

Adapun proses-proses dasar dalam kloning DNA meliputi :

1. Pemotongan DNA (DNA organisme yang diteliti dan DNA vektor)

2. Penyambungan potongan-potongan (fragmen) DNA organisme dengan DNA vektor menggunakan enzim ligase

3. Transformasi rekombinan DNA (vektor + DNA sisipan) ke dalam sel bakteri Eschericia coli.

4. Seleksi (screening) untuk

Post a Comment

Artikel Terkait Tips Motivasi