Please remember these important rules when handling restriction enzymes.
a. RE must be kept on ice and returned to ice as soon as you are finished using them. Room temperature will cause them to lose activity.
b. Hold the tube by the center, do not hold the bottom of the tube with your *warm* hands.
c. Check the pipette tip to be sure that enzyme is there. Usually use 1uL of enzyme, and the enzyme solution is thick (stored in glycerol).
Harap diingat aturan penting saat menangani enzim restriksi.
a. RE harus disimpan di atas es dan kembali ke es segera setelah Anda selesai menggunakan mereka. Suhu kamar akan menyebabkan mereka kehilangan aktivitas.
b. Pegang tabung oleh pusat, tidak memegang bagian bawah tabung dengan * hangat tangan * Anda.
c. Periksa ujung pipet untuk memastikan bahwa enzim ada. Biasanya digunakan 1UL enzim, dan larutan enzim tebal (disimpan dalam gliserol).
2. A Unit of Restriction Enzyme Activity
All enzymes are measured in units of activity but of course the activity varies from enzyme to enzyme, depending on its function. The activity of restriction enzymes is the ability to cleave DNA. The definition of one Unit (U) of restriction enzyme activity is given below. You should know, and understand, this definition. The amount of restriction enzyme in microliters (uL) needed to completely digest (cleave) one microgram (ug) of substrate DNA in one hour at the optimal temperature of the enzyme in a 50-uL reaction volume.
Semua enzim diukur dalam satuan kegiatan tapi tentu saja aktivitas bervariasi dari enzim ke enzim, tergantung pada fungsinya. Aktivitas enzim restriksi adalah kemampuan untuk memotong DNA. Definisi satu Unit (U) aktivitas enzim restriksi diberikan di bawah ini. Anda harus tahu, dan mengerti, definisi ini. Jumlah enzim restriksi di mikroliter (uL) yang diperlukan untuk benar-benar mencerna (membelah) satu mikrogram (ug) dari DNA substrat dalam satu jam pada suhu optimal enzim dalam volume reaksi 50-uL.
Many enzymes are sold as 10 Units per uL of enzyme solution. Thus 1 uL of enzyme solution should cut 10 ug of DNA. Normally, for the restriction digests that we perform in lab, 0.5 – 1.0 uL of enzyme is sufficient to cut the amount of DNA in the digest. The number of units of activity will help you determine how much of the enzyme to use in a restriction digest. You need to use enough enzyme to cut the DNA to completion, but too great of an excess may be detrimental to the digest. Also, these enzymes are expensive and using more than we need wastes money. Each enzyme has certain requirements for optimal activity, including the proper restriction enzyme buffer and incubation at the correct temperature. The enzyme’s supplier will provide buffer and instructions for optimal digest activity.
Banyak enzim yang dijual sebagai 10 Unit per uL larutan enzim. Jadi 1 uL larutan enzim harus memotong 10 ug DNA. Biasanya, untuk pembatasan mencerna bahwa kami tampil di lab, 0,5-1,0 uL enzim cukup untuk memotong jumlah DNA dalam digest. Jumlah unit aktivitas akan membantu Anda menentukan berapa banyak enzim untuk digunakan dalam pembatasan digest. Anda perlu menggunakan cukup enzim untuk memotong DNA sampai selesai, tapi terlalu besar kelebihan dapat merugikan digest. Juga, enzim ini mahal dan menggunakan lebih dari yang kita butuhkan limbah uang. Setiap enzim memiliki persyaratan tertentu untuk aktivitas optimal, termasuk buffer enzim restriksi yang tepat dan inkubasi pada suhu yang benar. Pemasok enzim akan memberikan penyangga dan petunjuk untuk aktivitas optimal mencerna.
a. RE must be kept on ice and returned to ice as soon as you are finished using them. Room temperature will cause them to lose activity.
b. Hold the tube by the center, do not hold the bottom of the tube with your *warm* hands.
c. Check the pipette tip to be sure that enzyme is there. Usually use 1uL of enzyme, and the enzyme solution is thick (stored in glycerol).
Harap diingat aturan penting saat menangani enzim restriksi.
a. RE harus disimpan di atas es dan kembali ke es segera setelah Anda selesai menggunakan mereka. Suhu kamar akan menyebabkan mereka kehilangan aktivitas.
b. Pegang tabung oleh pusat, tidak memegang bagian bawah tabung dengan * hangat tangan * Anda.
c. Periksa ujung pipet untuk memastikan bahwa enzim ada. Biasanya digunakan 1UL enzim, dan larutan enzim tebal (disimpan dalam gliserol).
2. A Unit of Restriction Enzyme Activity
All enzymes are measured in units of activity but of course the activity varies from enzyme to enzyme, depending on its function. The activity of restriction enzymes is the ability to cleave DNA. The definition of one Unit (U) of restriction enzyme activity is given below. You should know, and understand, this definition. The amount of restriction enzyme in microliters (uL) needed to completely digest (cleave) one microgram (ug) of substrate DNA in one hour at the optimal temperature of the enzyme in a 50-uL reaction volume.
Semua enzim diukur dalam satuan kegiatan tapi tentu saja aktivitas bervariasi dari enzim ke enzim, tergantung pada fungsinya. Aktivitas enzim restriksi adalah kemampuan untuk memotong DNA. Definisi satu Unit (U) aktivitas enzim restriksi diberikan di bawah ini. Anda harus tahu, dan mengerti, definisi ini. Jumlah enzim restriksi di mikroliter (uL) yang diperlukan untuk benar-benar mencerna (membelah) satu mikrogram (ug) dari DNA substrat dalam satu jam pada suhu optimal enzim dalam volume reaksi 50-uL.
Many enzymes are sold as 10 Units per uL of enzyme solution. Thus 1 uL of enzyme solution should cut 10 ug of DNA. Normally, for the restriction digests that we perform in lab, 0.5 – 1.0 uL of enzyme is sufficient to cut the amount of DNA in the digest. The number of units of activity will help you determine how much of the enzyme to use in a restriction digest. You need to use enough enzyme to cut the DNA to completion, but too great of an excess may be detrimental to the digest. Also, these enzymes are expensive and using more than we need wastes money. Each enzyme has certain requirements for optimal activity, including the proper restriction enzyme buffer and incubation at the correct temperature. The enzyme’s supplier will provide buffer and instructions for optimal digest activity.
Banyak enzim yang dijual sebagai 10 Unit per uL larutan enzim. Jadi 1 uL larutan enzim harus memotong 10 ug DNA. Biasanya, untuk pembatasan mencerna bahwa kami tampil di lab, 0,5-1,0 uL enzim cukup untuk memotong jumlah DNA dalam digest. Jumlah unit aktivitas akan membantu Anda menentukan berapa banyak enzim untuk digunakan dalam pembatasan digest. Anda perlu menggunakan cukup enzim untuk memotong DNA sampai selesai, tapi terlalu besar kelebihan dapat merugikan digest. Juga, enzim ini mahal dan menggunakan lebih dari yang kita butuhkan limbah uang. Setiap enzim memiliki persyaratan tertentu untuk aktivitas optimal, termasuk buffer enzim restriksi yang tepat dan inkubasi pada suhu yang benar. Pemasok enzim akan memberikan penyangga dan petunjuk untuk aktivitas optimal mencerna.
Post a Comment