1. Cloning of the gene
Cloning the gene consists of several steps, including cutting the DNA into fragments with a size of several hundred to thousands kb (kilobase), then this fragment inserted into bacterial vectors for cloning. Various kinds of vectors are designed to bring the DNA of different lengths. Plasmids, cosmids, Faga P1, BAC (bacterial artificial chromosome), and YAC (Yeast Artificial Chromosome) DNA can carry up to 20 kb, 40 kb, 90 kb, 200 kb, and 1000 kb, respectively. Each vector, containing only a fragment of DNA, inserted into bacteria, which are then amplified, creating a clone. A large number of each fragment of DNA is then isolated from each clone. Expression of cloned genes have been saved with the propagation cloning performed in bacteria containing the DNA fragment.
1. Kloning gen
Kloning gen terdiri atas beberapa tahapan, diantaranya memotong DNA menjadi fragmen-fragmen dengan ukuran beberapa ratus hingga ribuan kb (kilobase), selanjutnya fragmen ini dimasukkan ke dalam vektor bakteri untuk kloning. Berbagai macam vektor didesain untuk membawa DNA dengan panjang yang berbeda. Plasmid, kosmid, faga P1, BAC (bacterial artificial chromosome), dan YAC (Yeast Artificial Chromosome) dapat membawa DNA hingga 20 kb, 40 kb, 90 kb, 200 kb, dan 1000 kb secara berturut-turut. Setiap vektor, hanya mengandung satu fragmen DNA, dimasukkan ke dalam bakteri, yang kemudian teramplifikasi, membentuk suatu klon. Sejumlah besar setiap fragmen DNA kemudian diisolasi dari setiap klon. Ekspresi kloning gen telah disimpan dengan perbanyakan kloning yang dilakukan pada bakteri yang mengandung fragmen DNA tersebut.
Directly cloned DNA fragments containing a specific gene often can not be done. CDNA cloning is right is usually the intermediate or middle stages. For this purpose, a type of cell diretrotranskripsi mRNA into DNA using reverse-transcriptase enzyme of the virus. The resulting single-stranded DNA with caran is then converted form the double-stranded DNA using DNA polymerase. The resulting DNA fragment was cloned into plasmid further to produce cDNA bank.
Kloning fragmen DNA secara langsung yang mengandung gen tertentu seringkali tidak bisa dilakukan. Kloning cDNA yang tepat biasanya merupakan tahapan intermediat atau pertengahan. Untuk tujuan ini, mRNA suatu jenis sel diretrotranskripsi menjadi DNA menggunakan enzim reverse-transkriptase virus. DNA untai tunggal yang dihasilkan dengan caran ini kemudian diubah mejadi DNA untai ganda menggunakan DNA polimerase. Fragmen DNA yang dihasilkan selanjutnya dikloning ke dalam plasmid untuk menghasilkan bank cDNA.
2. Sequensing DNA
DNA Sequencing consists of determining the base sequence of a DNA fragment. Over the years the sequencing is done with a technique that takes time and a long process. Now this process is automated and carried out on an industrial scale and allows mensekuensing few thousand kilobases per day
2. Sequensing DNA
Sekuensing DNA terdiri atas penentuan urutan basa suatu fragmen DNA. Selama
bertahun-tahun sekuensing dilakukan dengan teknik yang butuh waktu dan proses lama. Sekarang proses ini bersifat automatis dan dilakukan dalam skala industri dan memungkinkan mensekuensing beberapa ribu kilobasa per hari.
3. Amplification of genes in vitro
A technique known as PCR (polymerase chain reaction) to amplify the DNA is most commonly used by practitioners PCR molecular biology techniques to synthesize the complementary strands of a DNA fragment that begins with a primer. For more details can be read in the article Understanding Techniques PCR (Polymerase Chain Reaction
3. Amplifikasi gen secara in-vitro
Teknik yang dikenal sebagai PCR (polymerase chain reaction) untuk amplifikasi DNA ini paling sering digunakan oleh praktisi biologi molekuler Teknik PCR mensintesis untaian komplementer suatu fragmen DNA yang dimulai dengan suatu primer. Untuk lebih jelasnya dapat dibaca pada artikel Mengenal Teknik PCR (Polymerase Chain Reaction).
4. Construction Gen
Gene research often requires the construction of a functional gene that starts from the various elements of the gene. These elements may regulator or possibly regional areas transcripts. They could have been in the original structure or the results of the mutation experiments. Construction of genes can help identify regulatory regions that control gene expression. Coding region or coding region may contain the original structure. Gene constructs can be used to assess the effect of the gene on the cell or organism as a whole. Transcript area may contain a reporter gene that encodes a protein that can be easilyvisualized or quantified by a specific enzyme activity.
4. Konstruksi Gen
Penelitian gen seringkali membutuhkan konstruksi gen fungsional yang dimulai dari berbagai elemen gen. Elemen-elemen ini mungkin daerah regulator atau mungkin daerah transkrip. Mereka bisa saja dalam struktur asli atau hasil mutasi dengan eksperimen. Konstruksi gen dapat membantu identifikasi daerah regulator yang mengontrol ekspresi gen. Daerah koding atau coding region mungkin mengandung struktur aslinya. Konstruk gen bisa digunakan untuk mengkaji pengaruh gen pada sel atau organisme secara menyeluruh. Daerah transkrip mungkin mengandung suatu gen reporter yang menyandi protein yang bisa dengan mudah divisualisasi atau dikuantifikasi berdasarkan aktifitas spesifik enzimnya.
Genetic engineering may be used on an industrial scale to reprogram a cell or organism to produce recombinant pharmaceutical related properties and to prevent immune rejection response in a cell or organ transplantation results.
Rekayasa genetika mungkin dapat digunakan pada skala industri untuk memprogram ulang sel atau organisme untuk menghasilkan rekombinan sifat terkait farmasi dan untuk mencegah respon penolakan imun pada sel atau organ hasil transplantasi.
Construction of genes implies the use of restriction enzymes that cut DNA at specific areas, chemical synthesis of oligonucleotides, DNA fragments amplified in vitro using PCR techniques, as well as connecting different DNA fragments using the enzyme ligase covalent bond. Mostly, the fragment was added to the plasmid which is then transferred into bacteria. Bacterial clones then diselksi and amplified.
Konstruksi gen mengimplikasikan penggunaan enzim restriksi yang memotong DNA pada daerah spesifik, sintesis oligonukleotida secara kimiawi, amplifikasi fragmen DNA secara in-vitro menggunakan teknik PCR, serta menyambungkan fragmen DNA yang berbeda dengan ikatan kovalen menggunakan enzim ligase. Sebagian besar, fragmen ini ditambahkan pada plasmid yang kemudian ditransfer ke dalam bakteri. Klon bakteri kemudian diselksi dan diamplifikasi.
Genetic engineering may be used on an industrial scale to reprogram a cell or organism to produce recombinant pharmaceutical related properties and to prevent immune rejection response in a cell or organ transplantation results.
5.Transfer of genes into cells
An isolated gene can be transcribed in vitro and mRNAnya also can be translated in a cell-free system. This technique allows researchers to obtain a small amount of protein, which may not be enough for some biochemical research, or for determining the biological activity of these proteins in vivo or determine its structure through the process of crystallization.
5.Transfer gen ke dalam sel
Suatu gen hasil isolasi dapat ditranskripsi secara in-vitro dan mRNAnya juga dapat ditranslasikan pada suatu sistem bebas sel. Teknik ini memungkinkan peneliti memperoleh sejumlah protein dalam jumlah kecil, yang mungkin tidak cukup untuk beberapa penelitian biokimia, atau untuk penentuan aktifitas biologi protein tersebut secara in vivo atau menentukan strukturnya melalui proses kristalisasi.
To effectively encoded and translated into a protein, a gene to be transferred into cells, which naturally may contain all of the factors that diper.lkan in the process of transcription and translation. There are various techniques that can be used for gene transfer process, including: 1). Cell fusion; 2). Use of chemical compounds; 3). Electroporation; 4). Injection using viral vectors; 5) microinjection.
Untuk dikodekan secara efektif dan ditranslasikan menjadi protein, suatu gen harus ditransfer ke dalam sel, yang secara alami mungkin mengandung semua faktor-faktor yang diper.lkan dalam proses transkripsi dan translasi. Ada berbagai teknik yang bisa digunakan untuk proses transfer gen, diantaranya: 1). Fusi sel; 2). Penggunaan senyawa kimia; 3). Elektroporasi; 4). Injeksi menggunakan vektor virus; 5) Mikroinjeksi.
Cloning the gene consists of several steps, including cutting the DNA into fragments with a size of several hundred to thousands kb (kilobase), then this fragment inserted into bacterial vectors for cloning. Various kinds of vectors are designed to bring the DNA of different lengths. Plasmids, cosmids, Faga P1, BAC (bacterial artificial chromosome), and YAC (Yeast Artificial Chromosome) DNA can carry up to 20 kb, 40 kb, 90 kb, 200 kb, and 1000 kb, respectively. Each vector, containing only a fragment of DNA, inserted into bacteria, which are then amplified, creating a clone. A large number of each fragment of DNA is then isolated from each clone. Expression of cloned genes have been saved with the propagation cloning performed in bacteria containing the DNA fragment.
1. Kloning gen
Kloning gen terdiri atas beberapa tahapan, diantaranya memotong DNA menjadi fragmen-fragmen dengan ukuran beberapa ratus hingga ribuan kb (kilobase), selanjutnya fragmen ini dimasukkan ke dalam vektor bakteri untuk kloning. Berbagai macam vektor didesain untuk membawa DNA dengan panjang yang berbeda. Plasmid, kosmid, faga P1, BAC (bacterial artificial chromosome), dan YAC (Yeast Artificial Chromosome) dapat membawa DNA hingga 20 kb, 40 kb, 90 kb, 200 kb, dan 1000 kb secara berturut-turut. Setiap vektor, hanya mengandung satu fragmen DNA, dimasukkan ke dalam bakteri, yang kemudian teramplifikasi, membentuk suatu klon. Sejumlah besar setiap fragmen DNA kemudian diisolasi dari setiap klon. Ekspresi kloning gen telah disimpan dengan perbanyakan kloning yang dilakukan pada bakteri yang mengandung fragmen DNA tersebut.
Directly cloned DNA fragments containing a specific gene often can not be done. CDNA cloning is right is usually the intermediate or middle stages. For this purpose, a type of cell diretrotranskripsi mRNA into DNA using reverse-transcriptase enzyme of the virus. The resulting single-stranded DNA with caran is then converted form the double-stranded DNA using DNA polymerase. The resulting DNA fragment was cloned into plasmid further to produce cDNA bank.
Kloning fragmen DNA secara langsung yang mengandung gen tertentu seringkali tidak bisa dilakukan. Kloning cDNA yang tepat biasanya merupakan tahapan intermediat atau pertengahan. Untuk tujuan ini, mRNA suatu jenis sel diretrotranskripsi menjadi DNA menggunakan enzim reverse-transkriptase virus. DNA untai tunggal yang dihasilkan dengan caran ini kemudian diubah mejadi DNA untai ganda menggunakan DNA polimerase. Fragmen DNA yang dihasilkan selanjutnya dikloning ke dalam plasmid untuk menghasilkan bank cDNA.
2. Sequensing DNA
DNA Sequencing consists of determining the base sequence of a DNA fragment. Over the years the sequencing is done with a technique that takes time and a long process. Now this process is automated and carried out on an industrial scale and allows mensekuensing few thousand kilobases per day
2. Sequensing DNA
Sekuensing DNA terdiri atas penentuan urutan basa suatu fragmen DNA. Selama
bertahun-tahun sekuensing dilakukan dengan teknik yang butuh waktu dan proses lama. Sekarang proses ini bersifat automatis dan dilakukan dalam skala industri dan memungkinkan mensekuensing beberapa ribu kilobasa per hari.
3. Amplification of genes in vitro
A technique known as PCR (polymerase chain reaction) to amplify the DNA is most commonly used by practitioners PCR molecular biology techniques to synthesize the complementary strands of a DNA fragment that begins with a primer. For more details can be read in the article Understanding Techniques PCR (Polymerase Chain Reaction
3. Amplifikasi gen secara in-vitro
Teknik yang dikenal sebagai PCR (polymerase chain reaction) untuk amplifikasi DNA ini paling sering digunakan oleh praktisi biologi molekuler Teknik PCR mensintesis untaian komplementer suatu fragmen DNA yang dimulai dengan suatu primer. Untuk lebih jelasnya dapat dibaca pada artikel Mengenal Teknik PCR (Polymerase Chain Reaction).
4. Construction Gen
Gene research often requires the construction of a functional gene that starts from the various elements of the gene. These elements may regulator or possibly regional areas transcripts. They could have been in the original structure or the results of the mutation experiments. Construction of genes can help identify regulatory regions that control gene expression. Coding region or coding region may contain the original structure. Gene constructs can be used to assess the effect of the gene on the cell or organism as a whole. Transcript area may contain a reporter gene that encodes a protein that can be easilyvisualized or quantified by a specific enzyme activity.
4. Konstruksi Gen
Penelitian gen seringkali membutuhkan konstruksi gen fungsional yang dimulai dari berbagai elemen gen. Elemen-elemen ini mungkin daerah regulator atau mungkin daerah transkrip. Mereka bisa saja dalam struktur asli atau hasil mutasi dengan eksperimen. Konstruksi gen dapat membantu identifikasi daerah regulator yang mengontrol ekspresi gen. Daerah koding atau coding region mungkin mengandung struktur aslinya. Konstruk gen bisa digunakan untuk mengkaji pengaruh gen pada sel atau organisme secara menyeluruh. Daerah transkrip mungkin mengandung suatu gen reporter yang menyandi protein yang bisa dengan mudah divisualisasi atau dikuantifikasi berdasarkan aktifitas spesifik enzimnya.
Genetic engineering may be used on an industrial scale to reprogram a cell or organism to produce recombinant pharmaceutical related properties and to prevent immune rejection response in a cell or organ transplantation results.
Rekayasa genetika mungkin dapat digunakan pada skala industri untuk memprogram ulang sel atau organisme untuk menghasilkan rekombinan sifat terkait farmasi dan untuk mencegah respon penolakan imun pada sel atau organ hasil transplantasi.
Construction of genes implies the use of restriction enzymes that cut DNA at specific areas, chemical synthesis of oligonucleotides, DNA fragments amplified in vitro using PCR techniques, as well as connecting different DNA fragments using the enzyme ligase covalent bond. Mostly, the fragment was added to the plasmid which is then transferred into bacteria. Bacterial clones then diselksi and amplified.
Konstruksi gen mengimplikasikan penggunaan enzim restriksi yang memotong DNA pada daerah spesifik, sintesis oligonukleotida secara kimiawi, amplifikasi fragmen DNA secara in-vitro menggunakan teknik PCR, serta menyambungkan fragmen DNA yang berbeda dengan ikatan kovalen menggunakan enzim ligase. Sebagian besar, fragmen ini ditambahkan pada plasmid yang kemudian ditransfer ke dalam bakteri. Klon bakteri kemudian diselksi dan diamplifikasi.
Genetic engineering may be used on an industrial scale to reprogram a cell or organism to produce recombinant pharmaceutical related properties and to prevent immune rejection response in a cell or organ transplantation results.
5.Transfer of genes into cells
An isolated gene can be transcribed in vitro and mRNAnya also can be translated in a cell-free system. This technique allows researchers to obtain a small amount of protein, which may not be enough for some biochemical research, or for determining the biological activity of these proteins in vivo or determine its structure through the process of crystallization.
5.Transfer gen ke dalam sel
Suatu gen hasil isolasi dapat ditranskripsi secara in-vitro dan mRNAnya juga dapat ditranslasikan pada suatu sistem bebas sel. Teknik ini memungkinkan peneliti memperoleh sejumlah protein dalam jumlah kecil, yang mungkin tidak cukup untuk beberapa penelitian biokimia, atau untuk penentuan aktifitas biologi protein tersebut secara in vivo atau menentukan strukturnya melalui proses kristalisasi.
To effectively encoded and translated into a protein, a gene to be transferred into cells, which naturally may contain all of the factors that diper.lkan in the process of transcription and translation. There are various techniques that can be used for gene transfer process, including: 1). Cell fusion; 2). Use of chemical compounds; 3). Electroporation; 4). Injection using viral vectors; 5) microinjection.
Untuk dikodekan secara efektif dan ditranslasikan menjadi protein, suatu gen harus ditransfer ke dalam sel, yang secara alami mungkin mengandung semua faktor-faktor yang diper.lkan dalam proses transkripsi dan translasi. Ada berbagai teknik yang bisa digunakan untuk proses transfer gen, diantaranya: 1). Fusi sel; 2). Penggunaan senyawa kimia; 3). Elektroporasi; 4). Injeksi menggunakan vektor virus; 5) Mikroinjeksi.
Post a Comment